1、定量PCR的模版既可以使總DNA，也可以是cDNA，但兩種做法的用途不同如果用總DNA做模版，你檢測的就是總DNA的拷貝數(shù)如果以cDNA為模版，你檢測的就是某個(gè)基因的表達(dá)水平。

2、你好，你要擴(kuò)增哪里，那里就是你的說的目的片段和基因本身沒有什么具體關(guān)系可以擴(kuò)增基因內(nèi)的一部分序列內(nèi)含子也好外顯子也好內(nèi)含子+外顯子也好，可以擴(kuò)增基因外的間隔序列，完全是根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要來定的。

3、PCR合成的時(shí)候當(dāng)然不只是需要引物，模板鏈也就是目的基因片段是必須的因?yàn)镈NA聚合酶合成DNA時(shí)只能從一段已有的DNA片段往上加脫氧核苷酸延伸子鏈，而不能從頭合成，所以需要一段引物引物就是目的基因在5#39段的一小段序列。

4、TE溶解更容易，更主要的原因是利用EDTA螯合金屬離子，因?yàn)榻饘匐x子是DNA酶的輔基，這樣就可以防止DNA被降解不過，這跟做PCR沒有什么關(guān)系，如果模板不是長期保存的，我就用雙蒸水溶解，做PCR效果和TE溶解的一樣TE只是習(xí)慣上用來。

5、PCR技術(shù)的基本原理該技術(shù)是在模板DNA引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依靠于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來啟動(dòng)合成，通過一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中。

6、PCR的原理該技術(shù)是在模板DNA引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來啟動(dòng)合成，通過一個(gè)或兩個(gè)人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段。

7、應(yīng)該是指樣品中DNA樣品的來源或種類例如，如果提取的是基因組DNA，由于基因組DNA數(shù)量比較多，引物可能會(huì)與多個(gè)位點(diǎn)結(jié)合，需要優(yōu)化PCR條件，否則可能獲得非特異擴(kuò)增，或是沒有擴(kuò)增結(jié)果而如果純化的是質(zhì)粒DNA，模板復(fù)雜度就低。

8、除非你做巢式PCR以PCR產(chǎn)物作為模板，首先必須保證你的PCR產(chǎn)物經(jīng)過純化，成分單一，因此，無論怎樣，第一輪PCR產(chǎn)物都要進(jìn)行純化，并且必須使用高保真酶以減少堿基錯(cuò)配的可能這樣才能以第一輪PCR產(chǎn)物為模板進(jìn)行第二輪擴(kuò)增。

9、兩個(gè)都可以雙鏈當(dāng)然可以，單鏈的話只要與其中一個(gè)引物結(jié)合延伸，就成雙鏈了。