1、pcr需要的原料有物PCR引物為DNA片段，細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈酶dNTP模板和緩沖液PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫經(jīng)常是60°C左右時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合；因?yàn)閮蓚€(gè)模板顯示出形式不一樣做的時(shí)候一般是提取植物總的RNA，然后采用OligodT或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，主要是獲得目的基因或檢測(cè)基因表達(dá)，判斷目的基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的相對(duì)量的變；在PCR反應(yīng)中，除了引物和模板，其他的試劑是完全一樣的，為了防止在加樣的過(guò)程中，造成其他試劑的污染，一定是把別的都取出來(lái)以后，再加引物，再加模板這樣其他人，或者其他樣品再用這些試劑的時(shí)候，相互污染的可能性??；你好，你要擴(kuò)增哪里，那里就是你的說(shuō)的目的片段和基因本身沒(méi)有什么具體關(guān)系可以擴(kuò)增基因內(nèi)的一部分序列內(nèi)含子也好外顯子也好內(nèi)含子+外顯子也好，可以擴(kuò)增基因外的間隔序列，完全是根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要來(lái)定的。

2、沒(méi)有模板多重pcr本身就是模板，導(dǎo)致沒(méi)有模板，該產(chǎn)品是由進(jìn)行構(gòu)思并制作的模板，是指作圖或設(shè)計(jì)方案的固定格式，有時(shí)也指DNA復(fù)制或轉(zhuǎn)錄時(shí)，用來(lái)產(chǎn)生互補(bǔ)鏈的核苷酸序列模板是將一個(gè)事物的結(jié)構(gòu)規(guī)律予以固定化標(biāo)準(zhǔn)化的；那么PCR的結(jié)果就是987ABCD123456EFGH789 以上例子中，789 987被稱(chēng)為保護(hù)堿基，ABCD EFGH通常是酶切位點(diǎn)，123456就是目的基因，而模板中的abcd efgh在設(shè)計(jì)模板時(shí)可有可無(wú)；RNA做模板就是所謂的反向PCR了耐高溫不是聚合酶的通性，聚合酶一般都不耐高溫，所以雖然PCR的思想早就有了，但是因?yàn)闆](méi)有耐高溫的聚合酶所以才無(wú)法付諸實(shí)踐，直到后來(lái)從水生棲熱菌中發(fā)現(xiàn)了Taq才使得PCR被廣泛使用；PCR技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫經(jīng)常是60°C左右時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的。

3、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)簡(jiǎn)稱(chēng)PCR英文全稱(chēng)Polymerase Chain Reaction， 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 簡(jiǎn)稱(chēng)PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其英文Polymerase Chain ReactionPCR是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性低溫退火復(fù)性及適溫；首先，如果你的引物不存在相互的干擾，那么你可以試著放在一個(gè)體系里面做實(shí)驗(yàn)其次，引物設(shè)計(jì)按照標(biāo)準(zhǔn)的方法就可以 最后，實(shí)在是要用電泳的方法，并且你的片段大小相差較大的情況下可以使用瓊脂糖，什么情況下用聚丙烯酰胺凝膠。

4、1一般普通的酶，DNA模板量在50到100ng都可以擴(kuò)增出來(lái)的 2高效一點(diǎn)的酶，幾ng也可以擴(kuò)增出來(lái)的1PCR反應(yīng)步驟類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物PCR由變性退火延伸三個(gè)；PCR分開(kāi)擴(kuò)增，2者或多者片段大于20bp可以混在一起 3730毛細(xì)管電泳可以區(qū)分出來(lái)。

5、其次是根據(jù)mix，算出總體積中mix使用的體積根據(jù)自己提取或者逆轉(zhuǎn)錄得到的DNA濃度，以及一次pcr反應(yīng)所使用模板的量，計(jì)算出DNA的體積根據(jù)引物濃度以及引物使用的終濃度，計(jì)算出引物使用的量最后用總體積減去上面幾部分的；PCR技術(shù)的基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程，其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)。

6、pcr的模板可以是蛋白質(zhì)PCR模板制備是PCR實(shí)驗(yàn)的首要步驟，模板制備是從待分析樣本中純化和濃縮核酸DNA或RNA以作為PCR擴(kuò)增模板的過(guò)程由于PCR用途多樣，用于提取核酸的材料可能是全血?jiǎng)又参锝M織培養(yǎng)細(xì)胞口腔涂片體液；1引物，引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度2酶，目前有兩種聚合酶供應(yīng)3dNTP，dNTP的質(zhì)量與濃度與PCR擴(kuò)增效率有密切關(guān)系，dNTP粉呈顆粒狀4模板，模板核酸的量與純化程度。