pcr模板是什么(pcr模板是什么意思)
1、pcr的模板可以是蛋白質(zhì)PCR模板制備是PCR實驗的首要步驟,模板制備是從待分析樣本中純化和濃縮核酸DNA或RNA以作為PCR擴增模板的過程由于PCR用途多樣,用于提取核酸的材料可能是全血動植物組織培養(yǎng)細(xì)胞口腔涂片體液。
2、你好,你要擴增哪里,那里就是你的說的目的片段和基因本身沒有什么具體關(guān)系可以擴增基因內(nèi)的一部分序列內(nèi)含子也好外顯子也好內(nèi)含子+外顯子也好,可以擴增基因外的間隔序列,完全是根據(jù)實驗需要來定的。
3、因為兩個模板顯示出形式不一樣做的時候一般是提取植物總的RNA,然后采用OligodT或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴增,主要是獲得目的基因或檢測基因表達(dá),判斷目的基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平的相對量的變。
4、第二種從mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得,在這種情況下,mRNA的cDNA,與原來的基因組DNA相同而且無內(nèi)含子相反地,對應(yīng)于在原來基因中沒有的而在mRNA存在的3#39末端的poly A序列等的核苷序列上,與外顯子序列先導(dǎo)序列以及后續(xù)序列等一起。
5、應(yīng)該是指樣品中DNA樣品的來源或種類例如,如果提取的是基因組DNA,由于基因組DNA數(shù)量比較多,引物可能會與多個位點結(jié)合,需要優(yōu)化PCR條件,否則可能獲得非特異擴增,或是沒有擴增結(jié)果而如果純化的是質(zhì)粒DNA,模板復(fù)雜度就低。
6、1首先PCR是體外大量擴增目的DNA的技術(shù)你問模板DNA是什么,這是不需要問的,你想擴增的目的基因是什么什么就是模板你用cDNA來做PCR模板當(dāng)然是cDNA雙鏈了一定是雙鏈cDNA做模板,引物當(dāng)然不是cDNA了,而是可以與。
7、PCR技術(shù)的基本原理該技術(shù)是在模板DNA引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依靠于DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)DNA聚合酶以單鏈DNA為模板,借助一小段雙鏈DNA來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中。
8、PCR合成的時候當(dāng)然不只是需要引物,模板鏈也就是目的基因片段是必須的因為DNA聚合酶合成DNA時只能從一段已有的DNA片段往上加脫氧核苷酸延伸子鏈,而不能從頭合成,所以需要一段引物引物就是目的基因在5#39段的一小段序列。
9、quot所以做PCR,用反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA做引物quot你這個理解是不對的,cDNA就是是作PCR模板用的mRNA反轉(zhuǎn)錄的時候,是會有片段斷裂或者不完整,但是,mRNA的拷貝數(shù)有幾十萬甚至幾千萬個,不會每個mRNA拷貝在你擴增的目的基因處都。
10、RNA做模板就是所謂的反向PCR了耐高溫不是聚合酶的通性,聚合酶一般都不耐高溫,所以雖然PCR的思想早就有了,但是因為沒有耐高溫的聚合酶所以才無法付諸實踐,直到后來從水生棲熱菌中發(fā)現(xiàn)了Taq才使得PCR被廣泛使用。
11、注意事項 首先是確定的總體積,可以選擇10ul, 20ul, 50ul等其次是根據(jù)mix,算出總體積中mix使用的體積根據(jù)自己提取或者逆轉(zhuǎn)錄得到的DNA濃度,以及一次pcr反應(yīng)所使用模板的量,計算出DNA的體積根據(jù)引物濃度以及引物使用。
12、引物是用來限制目的序列位置的,左右兩端各需要一個引物限制,所以是兩條模板是已經(jīng)確定含有目的DNA序列的基因細(xì)胞液溶液等等,只要你確定里邊含有目的基因,就可以通過PCR將其大量擴增。
13、你可以理解為打印文件,需要模板就是要復(fù)制,所以要找到需要的基因片段,用剪切酶取出來,不需要模板就是可以寫文件直接打印出來,最后都是復(fù)制。
14、兩個都可以雙鏈當(dāng)然可以,單鏈的話只要與其中一個引物結(jié)合延伸,就成雙鏈了。
15、在實時熒光PCR中模板的定量有2種方法絕對定量和相對定量絕對定量一般通過已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線來確定我們所感興趣基因的拷貝數(shù)相對定量指在一定樣品中靶序列相對于另一參照序列的量的變化如果你做的是DNA的定量,可以用DNA。
16、pcr需要的原料有物PCR引物為DNA片段,細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈酶dNTP模板和緩沖液PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫經(jīng)常是60°C左右時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結(jié)合。
17、1引物和模板在加之前離不離心 跟以后有沒有條帶沒有關(guān)系PCR沒有條帶一般是因為各物質(zhì)之間的比例或者退火溫度不合適,你需要調(diào)整和優(yōu)化每換一種試劑都要重新優(yōu)化PCR條件2把水bufferDntpmg離子做一個mixture。
18、PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)Polymerase chain reaction的縮寫,它是體外酶促合成特異DNA片段的方法這一方法的要點是合成兩個分別互補于待擴增DNA片段兩端的小片段引物,在含有引物待擴增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反應(yīng)體系。
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